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一、李斯特菌微生物檢測板產品介紹
1、原理及適用范圍
李斯特菌檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，選擇性試劑，冷水可溶性吸水凝膠和β-D-葡萄糖苷酶(β-D-glucosidase)的顯色底物( X-GLU )，李斯特菌檢測板適用于檢測或者計數食品及環境樣品中的李斯特菌菌數。李斯特菌檢測板檢測的李斯特菌包括單核細胞增生李斯特菌(Listeria.monocytogenes )，英諾克李斯特菌(Listeria.innocua)，威氏李斯特菌(Listeria.welshi)，但不能區分各種菌。 
2、李斯特菌微生物檢測板操作方法
2.1 食品樣品檢測
2.1.1 食品樣品處理：取樣品25 g(mL)放入裝有225 mL滅菌磷酸鹽緩沖液（或生理鹽水）的取樣罐或均質袋內，制成1:10的樣品勻液。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。 
2.2 環境樣品檢測
2.2.1 環境樣品采集：用無菌的涂抹棒或其他采樣設備收集環境樣品。濕潤采樣設備液體體積≤10 mL。濕潤劑可以為無菌水，滅菌生理鹽水（磷酸鹽緩沖液）或者緩沖蛋白胨水。
2.2.2 環境樣品處理：在收集的環境樣品中添加10 mL 滅菌生理鹽水（或磷酸鹽緩沖液），充分混勻。根據樣品污染程度及檢驗需要，可進一步制成10倍遞增的樣品稀釋液，選擇2～3 個適宜稀釋度的樣品勻液（液體樣品可包括原液）來進行接種。 
2.3 接種：將李斯特菌檢測板上層膜不干膠標簽部分揭開，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液均勻滴加到紙片上，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，靜置10 s左右，待樣品勻液被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩個檢測板作為重復。
2.4 培養：將檢測板疊在一起，倒置于36℃±1℃恒溫培養箱內，培養18～24h。
3、結果判讀
在檢(jian)(jian)測(ce)(ce)板(ban)上生長的藍(lan)綠(lv)色點(dian)(dian)(dian)即為李斯特菌陽性點(dian)(dian)(dian)，若檢(jian)(jian)測(ce)(ce)板(ban)上無(wu)菌生長或者(zhe)長出點(dian)(dian)(dian)為其(qi)他顏色點(dian)(dian)(dian)即為李斯特菌陰(yin)性。

4、計數原則及報告方式
4.1 樣品計數(shu)
4.1.1 以(yi)生長有(you)30～300CFU的檢測板為計數適(shi)宜(yi)范圍。
4.1.2 若只有(you)一個稀(xi)釋(shi)度檢測(ce)板上(shang)的菌(jun)落數(shu)(shu)在計數(shu)(shu)合適范圍30～300CFU之間，則計算兩個檢測(ce)板菌(jun)落數(shu)(shu)的平均(jun)值(zhi)，再除以相應的稀(xi)釋(shi)倍數(shu)(shu)，作為(wei)每克（毫升(sheng)）中菌(jun)落總(zong)數(shu)(shu)結果。
4.1.3 若有兩(liang)個連續稀釋(shi)度在適宜計數(shu)范(fan)圍內時，按式（1）計算：
                       ∑C
               N= ————————       •••••••••••••••••••（1） 
                   （n1+0.1n2）d
式中(zhong)：
N——樣品中(zhong)李(li)斯特菌(jun)菌(jun)落數；
∑C——兩個連(lian)續稀釋度檢測(ce)板（含適宜范圍菌落數的檢測(ce)板）李斯特菌落數之和；
n1——適宜范圍菌落(luo)數(shu)的*個稀釋度（低）檢測板個數(shu)；
n2——適宜范圍菌(jun)落(luo)數的第二個(ge)稀釋(shi)度（高）檢測板個(ge)數；
d——*稀釋(shi)度(du)的(de)稀釋(shi)倍數
 示例(li)：

               （245+247+31+30）
               ;N= ————————  =2514
                  （2+0.1×2）×10-1
結果(guo)表述為2.5×103CFU/g(mL)。
4.1.4 若所有(you)稀釋(shi)度(du)檢(jian)測板上(shang)均無菌落生長(chang)，則以(yi)小于1/d（d—*低稀釋(shi)倍數）計算(suan)。
4.1.5 低(di)數(shu)(shu)值的估算：如果實驗(yan)樣(yang)(yang)品原液（水及液體(ti)飲料）或初始稀釋懸液（其他樣(yang)(yang)品）的兩個檢測板(ban)上的菌落數(shu)(shu)均小于30CFU，計算兩個檢測板(ban)上的菌落數(shu)(shu)的平均數(shu)(shu)。計算式(shi)（2）：
                            ∑C
                  NE = ——    •••••••••••••••••••（2）
       ;                     nd
式中：
NE——每毫升或(huo)每克樣(yang)品中菌數的估算值；
∑C——兩(liang)個檢測板(ban)上(shang)菌(jun)落數的和；
n——檢測板的數(shu)量；
d——樣(yang)品初(chu)始(shi)懸液或實際接種懸液的(de)稀釋倍數。
4.1.6 大數值的估算：若所有(you)稀釋(shi)度的檢(jian)測(ce)(ce)板(ban)上菌落數均大于300CFU，計數接近300CFU的檢(jian)測(ce)(ce)板(ban)上的菌落并計算出平均數，其(qi)他檢(jian)測(ce)(ce)板(ban)可記錄(lu)為多不可計。結果計算式（3）：
                           ∑C
                  NE = ——   •••••••••••••••••••（3）
                           nd
式中(zhong)：
NE——每(mei)毫升或每(mei)克樣品中菌(jun)數的估算(suan)值；
∑C——兩個檢測板(ban)上菌落數之和；
n——檢測(ce)板的數量；
d——與樣品懸液相*的稀釋(shi)倍(bei)數。
5、結果報告
固體樣品以CFU/g為單(dan)位(wei)報(bao)告，液體樣品以CFU/mL為單(dan)位(wei)報(bao)告。
6、附加說明
注(zhu)意使用(yong)過(guo)的檢測板上帶有(you)活菌，需及時按照生物安全廢(fei)棄物處理(li)原則進行(xing)處理(li)。