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一、菌落總數微生物檢測板產品介紹
1、原理及適用范圍
菌落總數是指樣品經過處理，在一定條件下培養后所得1 mL（g）檢樣或單位面積樣品中所含菌落的總數，是常用的微生物檢測項目。菌落總數檢測板是一種預先制備好的一次性培養基產品，含有標準的營養培養基，吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在檢測板上呈紅色，這樣可縮短計數時間和增強計數效果。本產品適合于各類食品及食品原料中菌落總數的測定。執行標準：《食品安全國家標準 食品微生物學檢驗 菌落總數測定》（GB 4789.2）。
2、菌落總數微生物檢測板操作方法
2.1 樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質袋內，制成1:10的樣品勻液，需要時用1 mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調節樣品勻液pH至6.6～7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10稀釋液1 mL，注入含有9 mL稀釋液的試管內，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2.2 接種：一般食品選2～3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。將菌落總數檢測板置于平坦實驗臺面，揭開上層膜，用無菌吸管吸取1 mL樣品勻液滴加到檢測板內，迅速貼好上層膜并水平晃動檢測板，讓樣品勻液均勻吸附在濾紙上，靜置10s左右，待樣品勻液被吸附在濾紙上。每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3 培養：將檢測板疊在一起，倒置于恒溫培養箱內。一般食品培養溫度為36℃±1℃，培養15～24 h；水產品培養溫度為30℃±1℃，培養48h。
3、結果判讀
細菌在檢測板上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數適中（30～300 CFU）的檢測板進行計數，乘以稀釋倍數后即為每毫升（或每克）樣品中所含的細菌菌落總數。

4、計數原則及報告方式
4.1 若只有一個稀釋度檢測板上的菌落數在適宜計數范圍內，計算兩個檢測板菌落數的平均值，再將平均值乘以相應稀釋倍數，作為每克（或毫升）樣品中菌落總數結果。
4.2 若有兩(liang)個連續稀釋(shi)度的檢測(ce)板菌落數在適宜計數范圍內時，按式(1)計算(suan): 

式(shi)中：
N——樣品中菌(jun)落數；
∑C——檢(jian)測(ce)板上(含適(shi)宜(yi)范(fan)圍菌落數(shu)(shu)的(de)測(ce)試片)菌落數(shu)(shu)之(zhi)和；
n1——*稀釋(shi)度（低稀釋(shi)倍(bei)數）檢測板數；
n2——第二稀(xi)(xi)釋度（高稀(xi)(xi)釋倍數(shu)）檢測板數(shu)；
d——稀釋(shi)因子(*稀釋(shi)度(du))。
示例：

上述數據經“四舍五(wu)入”后，表示(shi)25000或2.5×104。
4.3 若所有的(de)稀釋度(du)菌落(luo)(luo)總數均(jun)大于300 CFU，則對稀釋度(du)較高的(de)檢測(ce)板(ban)進(jin)行(xing)計(ji)(ji)數，其他檢測(ce)板(ban)可記錄為多(duo)不可計(ji)(ji)，結(jie)果按平均(jun)菌落(luo)(luo)數乘以較高稀釋倍數計(ji)(ji)算。
4.4 若所有(you)的(de)稀釋度菌落(luo)總(zong)數均(jun)小于30 CFU，則(ze)應按(an)稀釋度*低的(de)平均(jun)菌落(luo)數乘以稀釋倍(bei)數計(ji)算。
4.5 若所有的(de)稀(xi)釋度（包括液(ye)體樣品原(yuan)液(ye)）均無菌落生長(chang)，則以小于1乘(cheng)以*低稀(xi)釋倍數計算。
4.6 若所有(you)稀(xi)(xi)釋(shi)度的平均菌(jun)落(luo)數均不在30 CFU～300 CFU之間，其中一(yi)部(bu)分(fen)小(xiao)于30 CFU或(huo)大于300CFU，則以接近30 CFU或(huo)300 CFU的平均菌(jun)落(luo)數乘以稀(xi)(xi)釋(shi)倍數計算(suan)。
4.7 菌落總數(shu)的報告
4.7.1 菌落總數在100 CFU以內(nei)時，按(an)“四(si)舍五入”原(yuan)則修約，采(cai)用兩位有效數字報告。
4.7.2 大于或等(deng)于100 CFU時(shi)，第三(san)位(wei)數字(zi)采(cai)用(yong)“四舍五入”原則(ze)修(xiu)約(yue)后(hou)，取(qu)前兩位(wei)數字(zi)，后(hou)面的0代替位(wei)數，也可(ke)用(yong)指數形(xing)式來表示，按(an)“四舍五入”原則(ze)修(xiu)約(yue)后(hou)，采(cai)用(yong)兩位(wei)有效數字(zi)。
4.7.3 若(ruo)測試片上一片紅(hong)色(se)無法(fa)計數(shu)時，則報(bao)告多不可計。
4.7.4 若(ruo)空白對照上有菌落生長，則此次(ci)檢測結果無效。
4.7.5 固體樣(yang)品以(yi)CFU/g為(wei)單位(wei)報(bao)告，液(ye)體樣(yang)品以(yi)CFU/mL為(wei)單位(wei)報(bao)告。
5、附加說明
5.1 菌(jun)落總數檢測板(ban)(ban)檢測結果與(yu)傳統平(ping)(ping)板(ban)(ban)計(ji)數瓊脂平(ping)(ping)板(ban)(ban)法(fa)符合(he)率可達90％以(yi)上。
5.2 磷酸(suan)緩沖液(ye)(ye)(ye)稀釋(shi)(shi)液(ye)(ye)(ye)的配(pei)制與滅菌：貯存液(ye)(ye)(ye)：稱(cheng)取34.0 g分(fen)析純(chun)磷酸(suan)二氫(qing)鉀（KH2PO4）溶(rong)于500 mL蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水或(huo)純(chun)凈水中(zhong)，用(yong)大(da)約175 mL的1 mol/L氫(qing)氧化鈉（NaOH）溶(rong)液(ye)(ye)(ye)調節(jie)PH至(zhi)(zhi)7.2，用(yong)蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水稀釋(shi)(shi)至(zhi)(zhi)1000 mL后貯存于冰箱。稀釋(shi)(shi)液(ye)(ye)(ye)：取貯存液(ye)(ye)(ye)1.25 mL，用(yong)蒸(zheng)(zheng)餾(liu)水稀釋(shi)(shi)至(zhi)(zhi)1000 mL，分(fen)裝于適宜容器中(zhong)，121℃高壓滅菌15 min，或(huo)放入消毒碗柜中(zhong)消毒。
5.3 生理鹽水的配制與滅菌：取8.5 g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000 mL蒸餾水或(huo)純凈水中(zhong)(zhong)(zhong)，分裝(zhuang)于適宜(yi)容器中(zhong)(zhong)(zhong)，121℃高壓滅菌15 min，或(huo)放入消(xiao)毒碗柜中(zhong)(zhong)(zhong)消(xiao)毒。
5.4 注(zhu)意使用過的檢(jian)測板(ban)上帶有活(huo)菌，需及時(shi)按(an)照生物(wu)安全廢棄物(wu)處理(li)原則(ze)進行處理(li)。